DB 31 2010-2012 火锅食品中罂粟碱

DBDBDBDB 上 海 市 地 方 标 准
D D D D B B B B 31/2010 — 2012
上海市食品药品监督管理局 发布
2012 - 10 - 26 发布 2012 - 10 - 26 实施
食品安全地方标准
火锅食品中罂粟碱 、 吗啡 、 那可丁 、 可待
因和蒂巴因的测定
液相色谱 - 串联质谱法D B 31/2010 — 2012
I
前 言
本标准的附录 A 、附录 B 为资料性附录。D B 31/2010 — 2012
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食品安全地方标准
火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定
液相色谱 - 串联 质谱法
1 范围
本标准规定了火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色谱 - 串联 质谱测定方法 。
本标准适用 于 火锅酱料、汤料、调味 油和固体类调味粉 等 火锅 食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待
因、蒂巴因的测定。
2 原理
样品 用水或盐酸溶液分散 均匀 、乙腈提取后，经盐析分层，乙腈提取液用键合硅固相萃取吸附
剂净化 ， 离心 ， 液相色谱－串联质谱仪检测 ， 罂粟碱 、 那可丁和蒂巴因采用外标法定量 ， 吗啡和可
待因采用内标法定量。
3 试剂与材料
除 非 另 有规定 ， 本方法 所 用 试剂均为分析纯 或以上规格 ，水为 GB/T 6682 规定的 一 级水。
3.1 甲醇（ CH 3 OH ） ：色谱纯。
3.2 乙腈 （ CH 3 CN ） ：色谱纯。
3.3 甲酸 （ HCOOH ） ：色谱纯。
3.4 盐酸 （ HCl ） 。
3.5 甲酸铵 （ HCOONH 4 ） 。
3.6 氢氧化钠 （ NaOH ） 。
3.7 无水硫酸镁 （ MgSO 4 ） ： 研磨后在 500 ℃ 马弗炉内烘 5 h ， 200 ℃ 时取出装瓶 ， 贮于干燥器中 ， 冷却
后备用。
3.8 无水醋酸钠 （ CH 3 COONa ） 。
3.9 乙二胺 -N- 丙基硅烷（ PSA ）填料 ： 粒度 40 ～ 7 0 μ m 。
3.10 C18 填料 ： 粒度 40 ～ 5 0 μ m 。
3.11 盐酸溶液 （ 0.1 mol/L ） ：量取盐酸（ 3.4 ） 9 mL ，加水至 1 L ，摇匀备用。
3.12 甲酸铵溶液 （ 10 mmol/L ） ：准确称取 1.26 g 甲酸铵（ 3.5 ）溶解于适量水中，定容至 2 L ，混匀后
备用。
3.13 甲酸 甲 醇 溶液 （ 0.5 ％ ） ： 量取甲酸 （ 3.3 ） 1 mL ， 置 于 200 mL 容量瓶中 ， 用甲醇稀释并定容至刻
度，摇匀备用。
3.14 氢氧化钠溶液 （ 1 mol/L ） ：准确称取 40 g 氢氧化钠 （ 3.6 ） 溶解于适量水中，定容至 1 L ，混匀后
备用。
3.15 盐酸罂粟碱、吗啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因 标准 品：纯度不少于 98 ％。
3.16 内标物质：吗啡 - D3 ，可待因 - D3 。D B 31/2010 — 2012
2
3.17 标准储备液 （ 1.0 mg/mL ） ：精密称取盐酸罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和磷酸可待因 标准 品适
量，用 甲酸－ 甲 醇 溶液（ 3 .13 ）配制成罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的浓度均为 1.0 mg/mL
的溶液，作为标准储备液。 4 ℃ 避光保存， 有效期 三个月。
3.18 混合标准品溶液 ： 精密吸取浓度为 1.0 mg/mL 的罂粟碱 、 那可丁 、 蒂巴因储备液各 1 .0 mL 和浓度
为 1.0 mg/mL 的吗啡、可待因储备溶液各 5 mL 于 20 mL 容量瓶中，用乙腈（ 3.2 ）定容至刻度，摇匀，
即得含罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为 50 µ g/mL 和吗啡、可待因浓度为 250 µ g/mL 的混合标准品溶液 。
4 ℃ 避光保存， 有效期 三个月。
3.19 同位素内标工作溶液（ 5 .0 μ g/mL ） ：分别精密吸取内标物质（ 3 .1 6 ）适量，用甲醇（ 3 .1 ） 配制 成
吗啡 - D3 ，可待因 - D3 的 浓度 均 为 5 .0 μ g/mL 的溶液。 4 ℃ 避光保存， 有效期 三个月。
3.20 标准工作 溶 液的配制：分别精密吸取上述混合标准品溶液 （ 3.18 ） 和同位素内标工作 溶 液 （ 3.19 ）
适量 ， 用乙腈 （ 3 .2 ） 稀释成罂粟碱 、 那可丁 、 蒂巴因浓度为 1 .0 ng/mL 、 2.0 ng/mL 、 5.0 ng/mL 、 10.0 ng/mL 、
20.0 ng/mL 、 50 .0 ng/mL ， 吗啡 、 可待因浓度为 5 .0 ng/mL 、 10.0 ng/mL 、 25.0 ng/mL 、 50.0 ng/mL 、 100 ng/mL 、
250 ng/mL 的系列标准工作 溶 液 ， 内标溶液浓度 均 为 50 .0 ng/mL 。 临用新配 。
3.21 甲酸 乙腈 溶液（ 0.1 ％ ） ：量取甲酸（ 3 .3 ） 1 mL ，加乙腈（ 3 .2 ）稀释至 1 L ，摇匀，过滤。
3.22 甲酸甲酸铵溶液 （ 0.1 ％ ） ：量取甲酸（ 3 .3 ） 1 m L ，加甲酸铵溶液（ 3 .12 ）稀释至 1 L ，摇匀，过
滤。
3.23 滤膜： 0.22 μ m （尼龙 ） 。
3.24 pH 试纸： pH 1 ～ 14 。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱 - 串联 质谱仪 ：带 电喷雾离子源（ ESI ） 。
4.2 分析天平：感量 为 0.000 0 1 g 和 0.01 g 。
4.3 离心机： ≥ 10 000 转 / 分钟 。
4.4 超声波清洗器。
4.5 涡旋混合器。
5 分析步骤
5 .1 提取
5 .1.1 火锅酱料、汤 料 、调味油
称取 2 g 试样 （ 精确至 0.01 g ） 于 50 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中 ， 加入 150 µ L 同位素内标工作液
（ 3 .19 ） ，再加入 5 mL 水，振摇使分散均匀（酱类样品必要时可加 10 mL 水 ） ，加入 15 mL 乙腈（ 3 .2 ） ，
涡旋振荡 1 min ， 加入 6 g 无水硫酸镁 （ 3 .7 ） 和 1.5 g 无水醋酸钠 （ 3 .8 ） 的混合粉末 （ 或以相当的市售商
品代替 ） ，迅速振摇，涡旋振荡 1 min ，以 4000 转 / 分钟 离心 5 min ，取上清液待净化。
5 .1.2 固体 类调味 粉
称取 2 g 试样 （ 精确至 0.01 g ） 于 50 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中 ， 加入 150 µ L 同位素内标工作液
（ 3 .19 ） ，再加入 5 mL 盐酸 溶液 （ 3 .11 ）溶液，超声处理 30 分钟，用氢氧化钠溶液调节 pH 值呈 中性，
加入 15 mL 乙腈 （ 3 .2 ） ， 涡旋振荡 1 min ， 加入 6 g 无水硫酸镁 （ 3 .7 ） 和 1.5 g 无水醋酸钠 （ 3 .8 ） 的混合
粉末（或以相当的市售商品代替 ） ，迅速振摇，涡旋振荡 1 min ，以 4000 转 / 分钟 离心 5 min ，取上清液
待净化。
5 .2 净化
称取 50 mg （ ± 5 mg ） PSA （ 3 .9 ） ， 100 mg （ ± 5 mg ） 无水硫酸镁 （ 3 .7 ） ， 100 mg （ ± 5 mg ） C18 粉末D B 31/2010 — 2012
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（ 3 .10 ）置于 2 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中 ( 或以相当的市售商品代替 ） ，移取 1.5 mL 上清液（ 5 .1 ） 至
此离心管中，涡旋混合 1 min ，以 10 000 转 / 分钟 离心 2 min ，移取上清液， 0.22 μ m 滤膜（ 3 .23 ）过滤 ，
取滤液待测 。
6 测定
6 .1 参考液相色谱条件
a) 色谱柱： BEH HILIC （ 粒径 1.7 µ m ， 2.1 × 100mm ），或相当者；
b) 进样量： 5 μ L ；
c) 柱 温： 40 ℃ ；
d) 流 速： 0.3 mL/min ；
e ） 流动相 ： A 相 （ 3 .21 ） ：含 0.1% 甲酸的乙腈， B 相 （ 3 .22 ） ：含 0.1 % 甲酸的 10 mmol/L 甲酸铵
溶液，按表 1 进行梯度洗脱。
表 1 梯度洗脱程序
时间 / min A 相 / % B 相 / %
0.00 90 10
0.30 90 10
1.00 80 20
2.50 80 20
3.00 90 10
6.00 90 10
6 .2 参考质谱条件
a) 离子化方式：电喷雾电离；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多反应监测（ MRM ） ；
雾化气 、 气帘气 、 辅助气 、 碰撞气均为高纯氮气 ； 使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求 ，
参考条件见附录 A 。
6 .3 定性测定
在相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液
中的某种组分 色谱 峰的保留时间一致，样品 溶液的 定性离子相对丰度 比 与浓度相当标准溶液的定性离子
相对丰度比进行比较时，相对偏差不超过表 2 规定的范围，则可判定样品中存在该组分。
表 2 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 / % ＞ 50 20 ～ 50 10 ～ 20 <10
允许的相对偏差 / % ± 20 ± 25 ± 30 ± 50
6 .4 定量测定D B 31/2010 — 2012
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在仪器最佳状态下，对标准工作液进样，以罂粟碱、那可丁和蒂巴因的色谱峰面积为纵坐标，罂粟
碱、那可丁和蒂巴因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线 ， 外标法定量 ； 以吗啡和可待因的峰 面积 与相应
内标物 峰 面积的比值为纵坐标，吗啡和可待因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，内标法定量。
在上述色谱和质谱条件下， 7 种化合物的标准物质提取离子（定量）质谱图参见附录 B 。
6 .5 空白试验
除不称取样品外，按 5.1 、 5.2 步骤进行 后测定 。
7 分析 结果 的表述
样品中 罂粟碱、 吗啡、 那可丁 、可待因 和蒂巴 的含量按 下式计算：
错误！未找到引用源。 ………………………………………………………………… (1)
式中：
X — 试样中各待测物的含量，单位为微克每千克（ μ g/kg ） ；
c — 从标准曲线中读出的供试品溶液中各待测物的浓度，单位为微克每升（ µ g/L ） ；
V — 样液 的提取 体积，此处为 15 ，单位为毫升（ mL ） ；
m — 试样的质量，单位为克（ g ） 。
计算结果保留 三 位有效数字。
8 方法精密度
在重复 性条件下获得的两次独立 测定结果的 绝对差值不得超过算术平均值的 20 ％ 。
9 方法检出限和定量限
本标准 罂粟碱 、 吗啡 、 那可丁 、 可待因 和 蒂巴因的检 出 限分别为 8 μ g/kg 、 40 μ g/kg 、 8 μ g/kg 、 4 0 μ g/kg 、
8 μ g/kg 。 定量限分别为 25 μ g/kg 、 125 μ g/kg 、 25 μ g/kg 、 125 μ g/kg 、 25 μ g/kg 。
10 方法准确度
罂粟碱、那可丁和蒂巴因添加浓度范围为 25 μ g/kg ～ 250 μ g/kg ，吗啡、可待因添加浓度范围为 125
μ g/kg ～ 1250 μ g/kg 时，回收率为 70 ％ ～ 110 ％。D B 31/2010 — 2012
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附 录 A
质谱 / 质谱测定参考条件
5 种生物碱 及 2 个内标化合物 的定性离子对 、 定量离子对 、 去簇电压 （ DP ） 及碰撞气能量 （ CE ） 见 表
A .1 。
表 A.1 7 种化合物的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量
组分名称 定性离子对
（ m / z ）
定量离子对
（ m / z ） 去簇电压 （ DP ） / V
碰撞气能量
（ CE ） / eV
罂粟碱
340.4/202.2
340.4/202.2 92
38
340.4/171.1 49
吗啡
286.0/181.3
286.0/181.3 97
50
286.0/165.3 50
那可丁
414.4/220.5
414.4/220.5 95
30
414.4/353.3 34
可待因
300.4/215.2
300.4/215.2 90
34
300.4/165.4 55
蒂巴因
312.3/58.3
312.3/58.3 52
38
312.3/249.1 22
吗啡 - D3
289.4/185.2
289.4/185.2 95
40
289.4/165.2 53
可待因 - D3
303.5/215.3
303.5/215.3 80
35
303.5/165.2 60D B 31/2010 — 2012
6
附 录 B
7 种化合物标准物质的提取离子（定量）质谱图
图 B.1 7 种化合物标准物质的提取离子（定量）质谱图
（罂粟碱 ： 20 ng/mL 、 吗啡 ： 100 ng/mL 、 那可丁 ： 20 ng/mL 、 可待因 ： 100 ng/mL 、 蒂巴因 ： 20 ng/mL 、 吗啡 -D3 ： 50 ng/mL 、
可待因 -D3 ： 50 ng/mL ）
罂粟碱 m / z 340.4/202.2
吗啡 m/z 286.0/181.3
那可 丁 m/z 414.4/220.5
可待因 m/z 300.4/215.2
蒂巴因 m/z 312.3/58.3
吗啡 - D3 m/z 289.4/185.2
可待因 -D3 m/z 303.5/215.3
2.04
2.65
1.81
2.62
2.40
2.66
2.612161