沃特世ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA系统和ACQUITY UPLCXevo TQ MS系统分析饮料中的2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量 （1）

[应用纪要]
沃特世ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA系统和ACQUITY UPLC/Xevo TQ MS系统
分析饮料中的2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量
赵嘉胤.蔡麒.孙庆龙
引言
焦糖色素是一种允许使用的着色剂，我国对焦糖色使用量
的规定除个别产品外均为按生产需要适量使用，其中规定
仅有亚硫酸铵法生产地焦糖色允许使用在碳酸饮料中。而
以加氨或其铵盐制成的焦糖（Ⅲ类氨法焦糖和Ⅳ类亚硫酸
铵法焦糖）会产生4-甲基咪唑，并且4-甲基咪唑是一种能够
诱发肿瘤的高水平的化学物质。
焦糖色素被广泛用于食品以及饮料中，所以4-甲基咪唑的含
量监控也是必须被重视的，由于4-甲基咪唑分子极性很大，
含量很低，所以如何快速、准确地检测出其含量，就成为人
们现阶段研究的重点。目前我国国家标准中只有《焦糖色
中的4-甲基咪唑的测定-高效液相色谱法》，而对于饮料中
的4-甲基咪唑则没有相关检测方法。
沃特世（Waters®）公司所提供的整体解决方案，同时来监控
饮料中的4-甲基咪唑以及2-甲基咪唑。使用沃特世SPE的固相
萃取策略来对于复杂的样品基质进行净化，完成对于4-甲基
咪唑以及2-甲基咪唑的提取浓缩，而沃特世HILIC模式的色谱
保留，对于极性分子的色谱分离提供完美的效果，最后通过
UPLC® H-CLASS PDA以及UPLC/Xevo® TQ MS的分析，完成出色的定
性定量工作。
实验条件
样品前处理方案
固相萃取SPE解决方案——Oasis® MCX (3cc/60mg) 小柱净化取
3g饮料样品，超声5分钟,后待净化。
活化/平衡
3mL 甲醇 /3mL 水
上3mL样品
清洗 A: 2%甲酸水溶液/B: 100%甲醇
洗脱 5%氨化甲醇
氮气挥干
乙腈:甲醇（9:1）定容
上机分析
ACQUITY UPLC H-CLASS PDA超高效液相色谱分离条件： 
色谱柱：    ACQUITY UPLC® BEH HILIC Column; 2.1x100 mm,1.7µm
流动相 A：  乙腈
流动相 B：  5mM 甲酸铵
柱温：       35˚C
检测波长： 215nm
进样量：    5 µL
运行时间： 3 min
梯度表：    Time (min)   Flow (mL/min)    %A    Curve
                        0.00              0.5                    80       6
                       3.00              0.5                    80       6
ACQUITY UPLC Xevo TQ MS超高效液相色谱-串联质谱分析条件：
色谱柱：    ACQUITY UPLC BEH HILIC Column; 2.1x100 mm,1.7µm
流动相 A：  乙腈
流动相 B：  5mM 甲酸铵
柱温：       35˚C
进样量：    2 µL
运行时间： 3 min
梯度表：    Time (min)   Flow (mL/min)    %A    Curve
                      0.00              0.5                    80       6
                        3.00              0.5                    80       6
2-甲基咪唑 4-甲基咪唑
 
 [应用纪要]
实验结果及讨论
1.ACQUITY UPLC H-CLASS PDA分析
混合标准品色谱图
饮料空白样品图
基质添加回收色谱图
2.ACQUITY UPLC/Xevo TQ MS分析
混合标准品TIC
目标化合物 检测离子 电离模式 离子对 锥孔电压 碰撞能量
4-甲基咪唑 [M+H]+ ES+
83>56
38V 14V
83>42
2-甲基咪唑 [M+H]+ ES+
83>42
38V 14V
83>56[应用纪要]
3.2.3 茶饮料样品加标与空白对比分析
 
3.2.4 可乐样品加标与空白对比分析
 
通过分析结果可以看出， 4-甲基咪唑和2-甲基咪唑分子极性
很大，一般反相很难保留，多用离子对试剂来增加保留，但
由于离子对色谱方式平衡时间很长，增加整体分析周期，同
时对于色谱柱以及仪器的损耗很大，最关键是无法进行有
效的质谱方法分析。而沃特世公司HILIC模式的极性分析方案
可以非常好的进行极性分子的保留，流动相简单，优异兼容
质谱条件，使4-甲基咪唑和2-甲基咪唑有非常好的分离效果
以及灵敏度。
同时由于目标化合物极性很大，对于前处理的要求非常高，
分离提取是个难点，而沃特世公司的固相萃取方案能使样品
达到非常好的净化效果，通过Oasis MCX进行保留分离，同时
能够减少样品杂质对于色谱柱以及整个仪器系统的损害。由
沃特世ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA和ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS所
提供的超高效性能以及灵敏度，使得4-甲基咪唑和2-甲基咪
唑的分析达到理想效果。
结论
1.采用ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA和ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS
可以快速高效地对4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的含量进行测
定， ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA灵敏度可以达到1mg/kg， ACQUITY
UPLC / Xevo TQ MS灵敏度可以达到1µg/kg。
2.应用沃特世固相萃取SPE解决方案配合HILIC模式色谱保留，
对于大极性的小分子有很好的保留以及分离提取的作用，达
到理想净化效果以及色谱分离效果。
3.从样品前处理到样品色谱质谱分析的整体解决方案，给客
户提供一体化的服务解决样品分析过程中可能遇到的所有
问题，帮助客户成功！沃特世科技（上海）有限公司
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