食品安全标准《蛋白质含量的测定改进》（GB 5009.5-2010）

测定食品中的蛋白质组份，有了改进（GB 5009.5-2010）

11  仪器和设备
11.1   分光光度计。
11.2    电热恒温水浴锅：100 ℃ ± 0.5 ℃。
11.3   10 mL 具塞玻璃比色管。
11.4    天平：感量为 1mg。
12  分析步骤
12.1   试样消解
称取经粉碎混匀过 40 目筛的固体试样 0.1 g～0.5 g（精确至0.001 g）、半固体试样 0.2 g～1 g（精确
至 0.001 g）或液体试样 1 g～5 g（精确至 0.001 g），移入干燥的 100 mL 或 250 mL定氮瓶中，加入 0.1 g
硫酸铜、1 g硫酸钾及 5 mL 硫酸（10.3），摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以 45°角斜支于有小孔的
石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体
呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入 20 mL水，放冷后移入 50 mL 或 100 mL
容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空
白试验。
12.2    试样溶液的制备
吸取 2.00 mL～5.00 mL 试样或试剂空白消化液于 50 mL 或 100 mL 容量瓶内， 加 1 滴～2滴对硝基
苯酚指示剂溶液（10.12） ，摇匀后滴加氢氧化钠溶液（10.11）中和至黄色，再滴加乙酸溶液（10.13）
至溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。
12.3    标准曲线的绘制
吸取 0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL 和 1.00 mL 氨氮标准使
用溶液（相当于 0.00 µg、5.00 µg、10.0 µg  、20.0 µg、40.0 µg、60.0 µg、80.0 µg和 100.0 µg 氮） ，分
别置于 10 mL 比色管中。加 4.0 mL 乙酸钠-乙酸缓冲溶液（10.15）及4.0 mL 显色剂（10.16），加水稀
释至刻度，混匀。置于 100 ℃水浴中加热 15 min。取出用水冷却至室温后，移入 1 cm比色杯内，以零
管为参比，于波长 400 nm处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。 
12.4    试样测定
吸取 0.50 mL～2.00 mL（约相当于氮＜100 μg）试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于 10 mL 比
色管中。以下按 12.3 自“加 4 mL 乙酸钠-乙酸缓酸溶液（pH 4.8）及 4 mL 显色剂……”起操作。试样
吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。