玉米丝轴黑粉菌原生质体制备与再生条件的研究

玉米丝黑穗病是由玉米丝轴黑粉菌
f． 引起的严重威胁玉米产量的病害
20 世纪 90 年代前在中国发生较重 以后由于抗病
品种的推广有所减轻 近年来 由于新品种的引进
和抗性鉴定工作的滞后 玉米丝黑穗病又逐年加
重 每年因玉米丝黑穗病危害减产达 30 万 t
1
玉米
丝轴黑粉菌在玉米发芽期侵染 花期观察到明显症
状 雌雄穗产生充满孢子堆的病瘿 表现为典型的
苗期侵染 花期发病特点 一旦发病 往往整株都没
有收成 虽然该病在苗期也有些症状 如植株矮小
茎基膨大如笋状 叶片簇生等 但是症状不明显 且
不容易与其他病毒病 生理病害 根部虫伤等所致
症状相区分 因此难以在苗期发现病情 给该病的
早期防治带来一定难度 有学者研究苗期玉米丝黑
穗病的检测技术 进行了质壁分离法 PCR 检测技术
鉴定 2
以及利用苗期检测可溶性糖含量鉴定 3
等
这些方法有一定的局限性 难以应用于实际生产
人们选育较好的抗性品种用于玉米丝黑穗病防治
研究者在玉米抗玉米丝黑穗病育种方面的研究较
多 如抗性机理 抗性遗传 抗病基因定位和抗病种
质资源 4
等 从分子水平研究玉米丝轴黑粉菌的致
病机制 有助于从根本上控制该病的危害 目前对
玉米丝轴黑粉菌原生质体制备与再生条件的研究
宁平 1a 2
梁萍 2
向妮 1
郑用琏 1b
肖炎农 1
1．华中农业大学植物科学技术学院 a．湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室 武汉 430070
b．作物遗传改良国家重点实验室 武汉 430070 2．广西农业职业技术学院 南宁 530007
摘要 以玉米丝轴黑粉菌 f． 为供试菌株 对其孢子原生质体的制备和再生条件进
行研究 结果表明 交配型菌株 SR1 加入 5mg／mL 溶壁酶 LysingEnzymes 50mg／mL 崩溃酶 Drise-
lase 与 50mg／mL 蜗牛酶 Snailase 混合酶液 置于 28℃100r／min 摇床上酶解 10min 原生质体得率为
99．36％ 产量 1．35×108
个／mL 以山梨醇为稳渗剂 原生质体涂布于含有 1．0mol／L 山梨醇的 CM 再生培
养基上 再生率可达 35．63％
关键词 玉米丝轴黑粉菌 原生质体 制备 再生
中图分类号 S435．131．42 文献标识码 A 文章编号 －8 20 －
PreparationandRegenerationofProtoplastsof f．
NINGPing1a 2
LIANGPing2
XIANGNi
1
ZHENGYong－lian1b
XIAOYan－nong1
1．CollegeofPlantScienceandTechnologyofHuazhongAgriculturalUniversity a．TheKeyLabofCropDiseaseMonitoring＆Safety
ControlinHubei b．NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImprovement Wuhan430070 China 2．Gan AgriculturalVocational－
TechnicalCollege China
Abstract Toestablishprotoplastmediatedgenetictransformation preparationandregenerationofprotoplastsfrom
f．werestudied．Theresultsshowedthattheoptionalconditionfortheprotoplastpreparationwasthat matingtype
strainsSR1wereincubatedinthemixedenzymeliquidconsistingof5mg／mLlysing nzymes 50mg／mLdriselase 50mg／mL
snailaseat28℃withshakingat100r／minfor10min andtheyieldofprotoplastreached1．35×108
mLandthehighestpro-
ductionrateofprotoplastreached99．36％．TheprotoplastwasregeneratedontheCMplatescontaining1．0mol／LD－sorbitol
andthehighestregenerationratecouldreach35．63％．
Keywords f protoplast preparation regeneration第 期
表 各处理酶液的酶组合处理616