GB/T55ll-2008/Iso20483:2006 谷物和豆类粗蛋白含量测定

ICs 67,040
X lo
中华 人 民 共 和 国国 家 标 准
GB/T55ll-2008/Iso20483:2006
代 替
GB/T5511— 1985
谷物
粗蛋
和豆类 氮含量测定和
白质含量计算 凯氏法
Cereals and pulses-Determination  of the nitrogen content and calculation
of the crude protein  content-Kjeldahl  method
(ISo20483:2006,IDT)
⒛ 08-0⒏ 22发
布 200B-1⒉01实 施
局
会
蛐 员 跚 岍 鹏 管 桅 Ⅲ 鲴 标 脚 眩 轶国 中中
发布GB/T55l1-2008/Iso20483:2006
本标准等同采用国际标准 IsO⒛483:2006《 谷物和豆类 氮含量测定和粗蛋白质含童计算 凯
氏法》 。
为了便于使用,本标准对 IsO20483:200C进 行了下列编辑性修改:
——“ 本国际标准” -词 改为“ 本标准△
——用小数点“ 。 ” 代替作为小数点的逗号“ ,” ;
——删除国际标准的前言;
— — 将引用文件中的 ⒔O712替 换为 现 行国家标准 GB/T21305,Iso65⑽ 替 换为 GB/T10362。
本标准是对 GB/T5511-1985《 粮食、 油料检验 粗 蛋白质测定法》 的修订。
本标准与 GB/T5511—1985相 比主要变化如下:
——增加了原理、 规范性引用文件、 术语和定义、 扦样、 试样制备、 含水量浏定、 精密度和测试报告。
本标准自实施 日期起代替 GB/T5511—1985。
本标准的附录 A、附录 B相 附录 C均 为资料性附录。
本标准由国家浪食局提出。
本标准由全国稂油标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:国家粮食局科学研究院。
本标准主要起草人:张佳欣、 郝希成、 吴春华。
本标准所替代标准的历次版本发布情况为:
———
GB/T5511— 1985。
一 ꇾ日 一 刖www.bzfxw.com
GB/T55li-2008/Iso20483:2006
谷物和豆类 氮 含量测定和
粗蛋白质含量计算 凯 氏法
t告 :使用本标准可能涉及到具有危险的物质、 操作和设备.本 标准的主旨不是陈述与使用该标准
有关的所有安全问题 ,在使用本标准前,标准的使用者应建立适当的安全措施和规定应用的限制。
1 范 围
本标准规定了用凯氏法测定谷物、豆类及衍生产品中氮含量的测定方法和粗蛋白质含量的计算
方法。
本方法不能区分蛋白质氮和非蛋白质氮。如果测定非蛋白质氮含量非常重要 ,可以使用其他合适
的方法。
注:在 特定情况下,使用本方法测定硝酸盐和亚硝酸盐中的氮无法达到完全回收。
2 规 范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可便用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T10362 玉 米水分 测 定法 (GB/T10362— 1989,eqv⒔ o6540:1980)
GB/T21305 谷 物及谷物 制 品 水分 的测 定 常 规法 (GB/T21305-2007,Iso712:1998,IDT)
3 术 语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3 1
蜃民噌扌彐【  nitrogen con】 en】
应用本标准所规定的程序测得的氮含量。
注 :以 干物质的质量分数表示。
3.2
租蛋白 质合 且 crude pmtein ct,ntent
将应用本标准所规定的程序测得的氮含量乘以不同谷物或豆类的蛋白质换箅系数,得到粗蛋白质
含量。
注:以 干物质的质量分数表示。
4 原 理
试样在催化剂存在下用硫酸消解,反应产物用碱中和后蒸馏。释放出的氨被硼酸溶液吸收,吸收液
用硫酸溶液滴定,测定氮含量并计算粗蛋白质含量。
5 试 剂
除参考物质外,只使用经确认无氮的分析纯试剂,试验用水为蒸馏水或去离子水或同等纯度水.
耆告 :5,4、 5.8、 5.ll和 512中 提到的试剂 应 谨 慎 使用。
5.1 硫 酸钾(K2so‘)。
5.2 五 水硫酸铜(Cuso4· 5H20)。
1
丿www.bzfxw.com
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5,3 二 氧化钛(TlO2)。
5,4 硫 酸(H2so‘):c(H2so4)=18mol/L,F,9°(H2sα)=184g/mL。
55 石 蜡油。
56 M乙 酰 苯 胺 (C:H9NO):熔 点 114℃ ,氮 含量 1036g/100g。
5.7 色 氨 酸 (C】 1H12N202):熔 点 282℃ ,氮 含量 13.72V100g。
5,8 五 氧化二磷(P205)。
5.9 硼 酸 :水溶液 ,宀。 (H3Bo3)=40酊 L,或 所使用仪器推荐的浓度。
5.10 指 示剂 :按照所使用仪器的推荐,加人= A(510.D和 溶液 B(5.102)(例 如 :5体
积溶液 A和 1体 积溶液 B)。
注1:有 可能准各使用的硼酸溶
注 2:溶 液 A和 溶液 B的 比
也可以使用 pH电
5101 溶 液 A:200
100mL溶 液 。
(C2HsOH),配 制成
5102 溶 液 B:200 ),配 制成 100mL
溶液。
51l 氢 氧化钠水 也可以使用含氮
量少于或等于 0,
512 硫 酸 :标准
因为硫酸
5.13
也可以选择
5l0 浮 石 :颗粒
515 蔗 糖(可选
6 仪 器
机械研磨机。
筛子 :孔径 0,8
分析天平 :分度
消化、 蒸馏和滴定仪
消化单元应确保温度的
通过使用两种参考物质(5 温度的均匀性 ,并同时测定
回收率 。
蒸馏仪器也应通过进行已知量铵盐的
应大于或等于 998%.
7 扦 样
铵溶液(5.13)彐和检查回收率,回收率
实验室接受的样品应具有代表性,在运输或储藏过程中不应受损或改变。
本标准不规定扦样方法,推荐 Iso66狃 和 Iso13690给 出的扦样方法。
8 试 样制备
如果需要,样品要进行研磨,使其完全通过 0.8mm孔 径的筛子。对于粮食,至少要研磨 200g样
品,研磨后的样品要充分混匀。
2
6 1
62
6.3
6.4
含有指示剂(
,pH电 极需要每天校准。
(Ca H14Br4O5s)溶 于体积分数为
液,c(H2
溶液,c(
含氮。
≡ 0,05mol/L.www.bzfxw.com
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9 水 分测定
用本标准第 8章 制备的部分样品测定水分(ⅡH)。测定水分的方法要适合测定对象(例 如谷物和谷
物制品按 GB/T21305测 定;玉米按 GB/T10362测 定 .或 者使用参考文献E10彐中描述的适合特殊种
子的方法)。
10 操 作步骤
10.1 通 则
如果需要检查是否满足重复佳限(12,2)的 要求 ,可按照 10.2到10.5的 步骤迸行两次独立的测定。
10.2 称 样
依据预估含氮量称量试样(第 8章 ),精 确到 0001g,使 试样的含氮量在 0005g~02g之 间,最好
大于 0.02g。
10.3 测 定
10.31 消 化
苷告 :下列操作应在通风良好,具有硫酸防护罩的条仵下进行。
转移试样(102)到 消解烧瓶,然后加人 :
— —
10g硫 酸 钾 (5.1);
—— 0,30g五 水硫 酸 铜 (52);
——030g二 氧化钛(53)(也 可以使用符合规定成分的粒状催化剂);
— — 20mL硫 酸 (54)。
∷         可 根据仪器情况调整硫酸的加人量,但应确认此改进可以满足对 N-乙 酰胺的回收率达到 99.5%
∷      和对色氨酸的回收率达到99.0%。
|        小 心混合以确保试样的完全浸润。将烧瓶置于顶热到 420℃ ±10℃ 的消化单元。从消化单元温
度再次达到厶20℃ ±10℃ 时开始计时,至少消化 2h,然 后取下自然冷却。
注 :建 议加人浮石(51衽)作 为沸腾调节器和加人如石蜡油(55)的 消泡剂 。
最短消化时间应使用参考物质进行检验,因为参考物质很难达到回收率的要求(见 105)。
遵循设备制造商关于蒸汽排空的建议 ,因为过强的吸力可能导致氮的损失。
10.32 蒸 馏
小心地向冷却后的消解烧瓶中加人 50mL水 ,放冷至室温。量取 50mL硼 酸(5.9)到 接收瓶中,无
论是使用目测比色或光学探头,均要向其中加至少 10滴 指示剂(5.10)。
连接好蒸馏装置,向消解烧瓶中加人 5mL过 量的氢氧化钠溶液完全中和所使用的硫酸 ,然后开始
蒸馏 。
根据仪器 ,所用的试剂量可以变化 。
10.3.3 滴 定
使用硫酸溶液(5.12)进 行滴定,滴定既可以在蒸馏过程中进行,也可以在蒸馏结束后对所有蒸馏液
进行滴定 。滴定终点的确定可以使用目测比色、 光学探头或用 pH计 的电位分析判定。
10.4 空 白试验
使用 10.3.1到10.3.3的 试剂,不加试样进行空白试验。
注:可以用 1g蔗 糖〈 5.15〉代替试验样品。
10.5 参 考物质测试(检查试验)
在五氧化二磷(58)的 存在下,60℃ ~80℃ 真空干燥参考物质。
进行检查试验 ,试样的最小量根据 N-乙 酰胺或色氨酸的含氮量决定,至少 0.15g。
注 :可 以在参考物质中加人 1g蔗 糖(5.15〉 。
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JN乙 酰胺的氮回收率至少为 99.5%,色 氨酸的氮回收率至少为 99.0%。
ll 结 果表述
l11 氮 含且
氮含量(叨N),以干基质量分数表示 ,按式(1)计 算 :
纳 =     ×
斋戋 扩嬲
¨… (1)
式中:
V。——空白试验滴定的硫酸溶液
V1— —试样滴定的硫酸溶液
o0⒕ ——
滴定 1mL O,5
c——滴定所使用的
仍——试样的质量 ,
勿H— —试样的水分
结果保留两位
ll.2 粗 蛋白含旦
根据谷物 乘 以测定获得的
氮含量(11.1)值,
结果保留两
12 精 密度
121 实 验室间
附录 A详 述
的其他浓度范围。
122 重 复性
用于附录以外
在同一实验室
互独立进行测试获
式(2)计 算 :
式中:
一被试对象相
%,重 复性限 '按
zt P— — 以干基产品质
对于粗蛋白含量在 7%￡
12,3 再 现性
在不同实验室,由不同的操作者 方法,对同一被测对象相互独立进
行测试获得的两次独立测试结果的绝对差
箅:
情况不超过 5%,再 现性限R按 式(3)计
R=(0.014× tLP)×28
对于粗蛋白含量在 7%~80%的 产品,见表 A1和 图A1。
124 临 界差
1241 同 -实 验室两组测定结果的比较
在重复性条件下进行两组测定的结果平均值之间的临界差按式(4)计 算 :
CDr=1.98×s'=1.98× (0063× 四P)=0.01247× vP · ················· (4)
12.4.2 两 个实验室间两组测定结果的比较
在不同实验室在重复性条件下进行两组测定的结果平均值之间的临界差按式(5)计 算 :
攻
2)
¨·…·…·…·…·…····…·…·…·
〈 3)
歹 单位为毫升(mD;
浓度,单位为摩尔/升 (
干物质
验结果可
立测 情 况
= (0,006
的样品粗蛋白含量(见表 B.D
A.1和 图 A1
同的设各,按相同GB/T551⒈ -2008/Iso20483:2006
∞R=2,8√ s炱 一 0.5s:=28√ 丽 。o14× 劭 P)z— 0.5× (0,0063× vP)2
=003716× 勿 P                …
¨……¨……………
(5)
13 测 试报告
测试报告应规定 :
⒆ 完 整的识别样品所需的全部信息;
b) 如 果已知取样方法,应说明使用的扦样方法;
o 采 用的参考本标准的测定方
d) 使 用的换箅系数(见 11,
o 所 有本标淮中没有 能影响测试结果的操作细节;
D 测 试结果 , 结果。 ,应说明两次测定
υ
ꇞ Ⅱ i凵
巳GB/T5511-2008/Iso20483:2006
附 录 A
(资料性附录)
实验室间测试结杲
方法的重复性 、 再现性和临界差是通过依据 ⒙05?25中 第 2、3和6章 的要求进行的两组实骏室间
环比测定建立的。
10家 实验室参与了此次测定。分析了 14种 产品和 4种 标准物质 .结 果见表 A1。
表 A.1 实 验室间实验统计结果
参 数
样
口 m
1 234 567 9 11
剔除溢出值后实验
室数 10 9 10 10 9
(干 基)蛋 白质含量
哂 (纳 ×57)平
均值
7 03 8 9衽 9 02 11 8813 9015 54 16 1921 9122 80 31 5761 3362 1979 46 79 99
重复性标准偏差 ,s, 0 11o 0衽 0 070 150 060 070 17 0 09 0 17 0 10o 85 0 27 0 570 19
变异 系数 〈 标准偏
差〃平均值)/%
1 560 450 781 260 430 衽5 1 05 0 还1 o ?5 0 321 39 o 430 720 2衽
重复性 限,r
('=28× s‘ )
0 310 110 200 42 o 1? 0 200 衽80 25 0 ⒋80 282 38 0 761 60o 53
再现性标淮偏差 ,sR 0 19o 1衽 0 08o 28 0 160 14o 340 290 460 么61 37o~791 02 o 83
变异 系数 (标 准偏
差 R/平 均值)/%
2? 1 5?0 892 361 15 0 902 10 1 32 2 02 1 462 23 1~271 281 04
再现性 限,R
〈 R=28sR)
o 530 39o.220 78o 衽5 o 39o~95o 81 1 291 293 84 2 212 862 32
样 品 :1—
—
普 通 小 麦 粉 1;2—
—
玉 米 J—
—
大 麦 “
— —
普 通 小 麦 ;5—
—
普 通 小 麦 粉 3;6—
—
杜 伦 麦 ;?—
—
普
通 小 麦 粉 2;8—
—
豌 豆 2;9—
—
豌 豆 △ 10—
—
蚕 豆 `1—
—
小 麦 谷 蛋 自 1;12—
—
犭
、
麦 谷 蛋 白 2· 13—
—
玉 米 谷
蛋 自 1;1么
— —
玉 米 谷 蛋 自 2。GB/T55ll-2008/1so20483:2006
X— —蛋白
y— —标准
图 A1表
给出了建
观察到这
o 5i的 线
b) 决 定系
c)  sR 自勺线
o 决 定系数GB/T55ll-2008/Iso20483:2006
附录 B
(资料性附录)
重复性限和再现性限对不同蛋白质含且的临界偏差和实际应用
B.1 同 -实 验室两组实验的对比
重复性条仵下获得的两组测定结果的两个平均值之间的临界偏差(CD')D按 式(B,1)计 算 :
∞'=2.8,√
卉
+斋
式中:
,— —重复性标准偏差;
,al和/Iz——每个平均值对应的测定结果数。
如果幼和 ,az均 等于 2,等 式简化为 :
………… ……………… (B1)
ω'=2 8‘ r
B2 两 个实验室间两组测定的对比
重复性条件下两个实验室获得的两组测定结果的两个平均值之间的临界偏差 (CDR)按 式 (B.3)
计算 :
∞R=28√ s炱  ￠
(卜 卉
一
舟)…
………………… (B.3)
式中:
s‘ ——重复性标准偏差 ,
sR— —再现性标准偏差;
幻 和砀——每个平均值对应的测定结果数。
如果 ,al和,Iz均 等于 2,等 式简化为 :
∞R=28√ s炱 一 0.5s炱    … ……………¨…… ¨ (B4)
重复性限和再现性限对不同蛋白质含量的实际应用见表 B1。
Ⅳ ξ乒 =
表 B1 重 复性限和再现性限对不同蛋白质含量的实际应用
蛋 白质含量
(ILN× 57)%
重复性标淮
偏差 〈 5‘ )
重复性限(r〉 再现性标准
偏差(JR)
再现性限α )
两平均值的临界差(CD)
在同一实验室 两实验室间
o 06 o 17 0 14 0 39 0.37
o 09 0 25 0 21 0 59 o 18 0 56
0 12 0 3衽 0 78 0 2⒋
0 15 0 衽2 0 35 0 98 o3
0 18 0 50 o 众2 1 18 o 36 1 12
0 21 o 59 0 49 1 37 o 衽2 1 31
0 2⒋ o 67 0 56 1 57 0 衽8 1 49
0 27 0 ?6 o 63 1 76 o 53 1 68
1) 临 界偏差是重复性条件下两组实验结果的两个平均值之间的差,见 Iso57孔 “。GB/T5511-2008/Iso20483:2006
表 (续)
假设
实验室一 :测 试 1+囫 亘彐 =平 均值 1(测 试 1+测 试 2)/z
实验室二 :测 试 5+囫 亘彐 =匪 均值 2(测 试 5+测 试 6)目
实验室三 :测 试 9+囫 试 1彐 =匣 均值 3(测 试 9+测 试 10)目
示例 :
重复性限被用于测试 1一 测试 2之 间或测试 5一 测试 6之 间。
再现性限被用于测试 1一 测试 6之 间或测试 2一 测试 9之 间。
临界差被用于平均值 1一 平均值 2之 间或平均值 1一 平均值 3之 间。
B。1
ꇋ 一 扌
|
匕 |、
蛋自质含量
(vN× 57)%
重复性标准
偏差(s')
重复性限(D
再现性标准
偏差(sR〉 再现挂限(R)
两平均值的临界差(CD)
在同一实验室 两实验室间
0 30 0 8么 0 70 1 96 0 59 1 87
0 33 0 92 0.77 2 16 0 65 2 05
0 36 1 01 0.8'1 2 35 0.71 2 24
o.39 1 09 o.91 2 55 0.77 2 ^3
o.么2 1.18 0 98 2.7~1 o.83 2 61
o 45 1.26 1 05 2.94 o 89 2~80
0 48 1 34 1 12 3~14 o 95 2.99GB/T551卜 -2008/Iso20483:2006
附 录 C
(资料性咐录冫
氮含Ⅰ换耸蛋白质合Ⅱ的换奔系数
氮含量换算蛋白质含量的校正因子见表 G1。
表 C.1 狃 含Ⅱ换多胥白质含Ⅱ的校正因子
农产品 校正因子
苷通小麦 57
杜伦麦 57
小芨研磨制品 5.7或6.⒛
饲料小麦
大麦
燕麦 5?或6.孔
黑麦 5.7
黑小麦 6.25
玉 米 6.25
豆类 6.25jf
cBlT 551  l-2008/rso 20483:2006
*+*tr
[1]  ISO 1871 Agricultural food products-General  directions for the determination  o{ nitrogen
by  the Kjeldahl method.
[2]  ISO 3188 Starches and derived  products-Determination  of  nitrogen content by the Kje-
dahl method-Titrimetric  method.
t3]  ISO 5725-2: 1994 Accuracy ( trueness and  precision)  of measurement methods and
results-  Part 2  :  Basic method for the determination o{ repeatability and reproducibility o{ a standard
measurement method.
i4]  ISO 5725-3:1994 Accuracy ( trueness and  precision)  of  measulement methods and
results-  Pait  3  :  Intermediate  measures of  the  precision  of a standard measurement method.
t5]  ISO 5725-6:1994 Accuracy ( trueness and  precision)  of  measurement methods and
results-  Part 6  :  Use  in  practice  of accuracy values.
t6l  ISO 5983-1 Animal {eeding stuffs-Determination  of nitrogen content and calculation of
crude  protein  contelrt-Part 13 Kjeldahl method.
[7]  ISO  6644  Flowing cereals and milled cereal products  Automatic sampling by  mechanical
means.
[8]  ISO 13690 Cereals, pulses  and milled products  Sampling of static batches.
[9]  NF V 03-050 Produits agricoles alimentaires-Directives  generales pour  le dosage de lazote
selon  la method de Kjeldahl.
[10]  BIPEA,  Conseils methodologiques  pour  le dosage de leau dans les  grains  et les  grains-
LU68 E 8405 Determination de la teneur en eau-Proteagineux(Fiche  n'4).
[11]  European Brewery Convention, Analytica EBC'1984.
[12]  Nitrogen-ammonia-protein  modilied Kjeldahl method titanium oxide and copper sulfate cat-
alyst. Offical  Methods and Recommended Practices of the AOCS'  (ed.  D, E. Firestone).  AOCS  Offi-
cial Method Ba Ai 4-91' AOCS Press' Champaign lL,7997.
[13]  Tkachuk, R. Nitrogen-to-protein conversion  factors for cereals and oilseed meals. Cereal
Chem.  '  46(4), 1969' pp.419-423.
[14]  ICC  Standard  105/2, Determination of crude protein  in cereals and cereal products  {or lood
and feed.6146