GB 14752-2010 食品添加剂 维生素B2(核黄素).pdf

  
中华人民共和国国家标准
GB 14752—2010
中华人民共和国卫生部   发布
2010-12-21 发布  2011-02-21 实施
食品安全国家标准
食品添加剂 维生素B2（核黄素）
 
 
 GB 14752—2010
I
前    言
本标准代替 GB 14752—1993《食品添加剂  维生素B2（核黄素）》。
本标准与 GB 14752—1993 相比,主要变化如下：
——鉴别试验增加了紫外-可见分光光度法和红外分光光度法鉴别，修改了荧光法鉴别；
——砷指标由≤3 mg/kg修改为≤2 mg/kg。
本标准的附录 A和附录 B 为规范性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
—— GB 14752—1993。
 
GB 14752—2010
1
食品安全国家标准
食品添加剂 维生素B2 (核黄素)
1 范围
本标准适用于经化学合成法及生物发酵法制得的食品添加剂维生素 B2（核黄素） 。
2 规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的
版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量
3.1 化学名称
7,8-二甲基-10-[（2S,3S,4R）-2,3,4,5-四羟基戊基]-3,10-二氢苯并蝶啶-2,4-二酮
3.2 分子式
C17H20N4O6
3.3 结构式
N
N
N
H
N
OH
CH3
H3C
O O
OH H
HO
HOH
H
 
3.4 相对分子质量
376.36（按2007 年国际相对原子质量）
4  技术要求
4.1   感官要求：符合表1 的规定。
表1 感官要求
项     目 要    求 检验方法
色泽  橙黄色
取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，
在自然光线下，观察其色泽和组织状态，
嗅其气味。
气味  微臭 
组织状态  结晶性粉末
性状
约在280℃时熔融，同时分解。溶液易变质。在碱
性溶液中或遇光变质更快
4.2  理化指标：应符合表2的规定。GB 14752—2010
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表2  理化指标
 
 
GB 14752-2010 食品添加剂 维生素B2(核黄素)
 
项     目  指    标  检验方法
维生素B2（核黄素）（以干基计），w/%    98.0～102.0  附录A 中A.4
比旋光度αm(20℃,D)/〔(
 
o)·dm2
·
 
kg-1
〕    -120～-140  附录A 中A.5
感光黄素的吸光度  ≤ 0.025  附录A 中A.6
干燥减量，w/%  ≤ 1.5  附录A 中A.7
灼烧残渣，w/%  ≤ 0.3  附录A 中A.8
重金属（以Pb 计）/（mg/kg）  ≤ 10  附录A 中A.9
砷（As）/(mg/kg)  ≤ 2  附录A 中A.10

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附 录 A
（规范性附录） 
检验方法 
A.1 安全提示
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。
若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。
A.2  一般规定
本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008 中规
定的三级水。未指明的溶液为水溶液。
试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明其他要求时，均按 GB/T 601、GB/T 602、
GB/T 603 之规定制备。
A.3  鉴别试验
A.3.1 荧光试验
A.3.1.1  方法原理
维生素 B2（核黄素）具芳香环和杂环，有长共轭结构的 π→π*跃迁，具有荧光性，在酸、碱性
条件下及加入各种还原剂均会使维生素 B2（核黄素）转变为无荧光的物质。
A.3.1.2  试剂和材料
A.3.1.2.1  盐酸溶液：1+2。
A.3.1.2.2  氢氧化钠溶液：40 g/L。
A.3.1.2.3  连二亚硫酸钠。
A.3.1.3  分析步骤
  取约 1 mg 实验室样品，加 100 mL 水溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧
光；分成二份：一份中加盐酸溶液或氢氧化钠溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠少许，
摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。
A.3.2 紫外-可见吸收光谱鉴别
A.3.2.1  方法原理
维生素 B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，其紫外-可见吸收光谱中有三个吸收峰（444
nm，375 nm与 267 nm） ，用 A444nm /A267nm及 A375nm /A267nm的比值来鉴别维生素 B2（核黄素） 。
A.3.2.2  试剂和材料
A.3.2.2.1  冰乙酸。
A.3.2.2.2  乙酸钠溶液：14 g/L。
A.3.2.2.3  实验室样品溶液：避光操作。取约0.075 g实验室样品，精确至0.001 g，置烧杯中，加1 mL
冰乙酸与75 mL水，加热溶解后，加水稀释，冷却至室温，移置500 mL棕色容量瓶中，再加水稀释至
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刻度，摇匀；精密量取10 mL，置100 mL棕色容量瓶中，加7 mL乙酸钠溶液，并用水稀释至刻度，摇
匀。
A.3.2.3  仪器和设备
A.3.2.3.1  紫外-可见分光光度仪。
A.3.2.3.2  石英池（1cm）。
A.3.2.4  分析步骤
取实验室样品溶液扫描，在波长 444 nm±1 nm、375 nm±1 nm与 267 nm±1 nm处有最大吸收，
并测定吸光度（A），计算 A375nm/A267nm的比值为 0.31～0.33和A444nm/A267nm的比值为 0.36～0.39。
A.3.3 红外光吸收图谱鉴别
A.3.3.1  试剂和材料
溴化钾：光谱纯，干燥品。
A.3.3.2  分析步骤
在红外灯下进行，以防止吸潮。
将实验室样品和溴化钾粉末置入玛瑙乳钵中研匀，装入压片模具制备样片并进行扫描。本品的
红外光吸收图谱应与对照的图谱（附录 B）一致。
A.4 维生素B2 的测定
A.4.1 方法原理
维生素 B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，在波长 444 nm 处有最大吸收，将样品溶
液于该波长处测定吸光度，以百分吸光系数（ 1%
1cm E ）计算即得其质量分数。
A.4.2 试剂和材料
A.4.2.1  冰乙酸。
A.4.2.2  乙酸钠溶液：14 g/L。
A.4.3 仪器和设备
    同 A.3.2.3。   
A.4.4 分析步骤
取实验室样品溶液（A.3.2.2.3），在波长444 nm ±1nm处，以水为空白对照，测定吸光度（A）。
A.4.5 结果计算 
维生素 B2（核黄素）的质量分数 w1，数值以%表示，按公式（A.1）计算：
1
2
5000
100% 323(1)100
A
w
mw
×
=×
××?×
……………………………………（A.1）
式中：
5000——实验室样品稀释体积，单位为毫升（mL）；
323——维生素B2（核黄素）的百分吸光系数（ 1%
1cm E ） ；
A——实验室样品溶液(A.3.2.2.3)的吸光度数值；
m——实验室样品质量的数值，单位为克（g） ；
2 w ——A.7 测得的干燥减量的数值， %。
两次平行测定结果的绝对差值不大于1.5%。

GB 14752-2010 食品添加剂 维生素B2(核黄素).

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A.5  比旋光度的测定
A.5.1 方法原理
维生素 B2（核黄素）的核糖醇侧链 2,3,4-位有三个不对称碳原子，具有旋光活性，在碱性条件
下，呈左旋光性，以此检查样品的比旋度。
A.5.2 试剂和材料
A.5.2.1  二硝基苯肼试液：取1.5 g 2,4-二硝基苯肼，加20 mL硫酸溶液（1+1） ，溶解后，加水使成
100 mL，过滤。
A.5.2.2  无醛乙醇：取2.5 g乙酸铅，置具塞锥形瓶中，加5 mL水溶解后，加1000 mL乙醇，摇匀，
缓缓加25 mL乙醇制氢氧化钾溶液（1→5） ，放置1h，强力振摇后，静置12h，倾取上清液，蒸馏即得。 
    检查：取25 mL 无醛乙醇，置锥形瓶中，加 75 mL 二硝基苯肼试液，置水浴上加热回流 24h，蒸
去乙醇，加 200 mL 硫酸溶液（2→100） ，放置24h 后，应无结晶析出。
A.5.2.3  盐酸标准滴定溶液：c（HCl）=0.1 mol/L。
A.5.2.4  无碳酸盐氢氧化钾溶液：取20 g氢氧化钾，加100mL无醛乙醇，放置过夜后，吸取上清液，
加无醛乙醇稀释成0.1 mol/L的溶液，用0.1 mol/L盐酸标准滴定溶液标定后，再精密量取18 mL，加新
沸过的冷水至100 mL，摇匀。
A.5.2.5  实验室样品溶液：称取约0.25 g实验室样品，精确至0.000 1 g，加无碳酸盐氢氧化钾溶液
溶解并定量稀释制成每1 mL中约含维生素B2（核黄素）5 mg的溶液，摇匀。
A.5.3 仪器和设备
A.5.3.1  旋光仪。
A.5.3.2  旋光测定管。
A.5.4 分析步骤
取实验室样品溶液，按 GB/T 613 测定。
A.5.5 结果计算
维生素B2（核黄素）的比旋光度 m α （20℃，D）按公式(A.2)计算：
              () 20C,D m
l α
α α
ρ
°=    …………………………………………(A.2)  
式中：
α —— 测得的旋光角,单位为度(°)；
l  —— 旋光管的长度,单位为分米(dm)；
α ρ —— 溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g/mL)。
A.6  感光黄素的测定
A.6.1 方法提要
维生素 B2（核黄素）几乎不溶于三氯甲烷，杂质感光黄素溶于三氯甲烷，在 440 nm 处有紫外
吸收，因此用三氯甲烷提取感光黄素，排除维生素 B2（核黄素）的干扰后，在此波长处测定，作限
量检查。但维生素 B2（核黄素）在乙醇中稍有溶解，为克服测定时的干扰，所以必须使用无醇三氯
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甲烷。
A.6.2 试剂和材料
A.6.2.1  无水硫酸钠。
A.6.2.2  无醇三氯甲烷：取500 mL三氯甲烷，用水洗涤3次，每次50 mL，分取三氯甲烷层，用无
水硫酸钠干燥12h以上，用脱脂棉过滤，蒸馏，即得。临用前配制。
A.6.3 仪器和设备
A.6.3.1  紫外-可见分光光度仪。
A.6.3.2  石英池（1 cm）。
A.6.4 分析步骤
A.6.4.1  实验室样品溶液的制备：称取约0.025 g实验室样品，精确至0.000 1 g，加10 mL无醇三氯
甲烷，振摇5min，过滤。
A.6.4.2  测定
取实验室样品溶液，在波长440 nm处，以无醇三氯甲烷为空白，测定吸光度（A）。
A.7  干燥减量的测定
A.7.1 仪器和设备
A.7.1.1  扁形称量瓶。
A.7.1.2  恒温干燥箱。
A.7.2 分析步骤
称取约 0.5 g实验室样品，精确至 0.000 1 g，置于105 ℃±2 ℃干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚
度不可超过 5 mm， 105 ℃±2 ℃干燥至恒重。
A.7.3 结果计算
维生素 B2（核黄素）干燥减量的质量分数 2 w ，数值以%表示，按公式（A.3）计算：
12
2 100% mm w
m
?
=× ………………………………………………（A.3）
式中：
1 m ——干燥前实验室样品和称量瓶的总质量数值,单位为克（g）；
    
2 m ——干燥后实验室样品和称量瓶的总质量数值,  单位为克（g）；
m——实验室样品的质量数值,  单位为克（g）。
取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于 0.05%。
A.8  灼烧残渣的测定
A.8.1 方法原理
     样品加硫酸经灼烧后所留的硫酸盐，用重量法测定。
A.8.2 试剂和材料
硫酸。
A.8.3 仪器和设备
A.8.3.1  瓷坩埚。
A.8.3.2  高温炉。 GB 14752—2010
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A.8.4 分析步骤
称取约1.0 g实验室样品，精确至 0.000 1 g，置于已在 550 ℃±50 ℃灼烧至恒重的瓷坩埚中，
用小火缓缓加热至完全炭化，冷却至室温后，加 1 mL 硫酸使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移
入高温炉中，在 550 ℃±50 ℃灼烧至恒重。
A.8.5 结果计算
维生素 B2（核黄素）灼烧残渣的质量分数 3 w ，数值以%表示，按公式（A.4）计算：
34
3 100% mm w
m
?
=× ……………………………………………（A.4）
式中：
3 m ——残渣和坩埚的总质量数值,单位为克（g）；
    
4 m ——坩埚的质量数值,  单位为克（g）；
m——实验室样品的质量数值,  单位为克（g）。
取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于 0.02%。
A.9    重金属的测定
A.9.1  方法原理
     样品中杂质金属在酸性（pH3.5）条件下，与硫化氢或硫化钠试液显色。样品与标准铅溶液同法
测定，以此检查其限度。
A.9.2  试剂和材料
A.9.2.1  硝酸。
A.9.2.2  硫酸。
A.9.2.3  盐酸。
A.9.2.4  甘油。
A.9.2.5  乙酸铵。
A.9.2.6  硝酸铅。
A.9.2.7  硫代乙酰胺。
A.9.2.8  氨试液：400→1000。
A.9.2.9  氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1 mol/L。
A.9.2.10  盐酸溶液：c（HCl）=2 mol/L。
A.9.2.11  盐酸溶液：c（HCl）=7 mol/L。
A.9.2.12  氨水溶液：c（NH3·H2O）=5 mol/L。
A.9.2.13  酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。
A.9.2.14  乙酸盐缓冲液（pH3.5） ：取25 g乙酸铵，加水25 mL溶解后，加38 mL 7 mol/L盐酸溶液，
用2 mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5（pH计） ，用水稀释至100 mL，即得。
A.9.2.15  硫代乙酰胺试液：取约4 g硫代乙酰胺，精确至0.01 g，加水使溶解成100 mL，置冰箱中
保存。临用前取5.0 mL混合液（由1 mol/L 15 mL氢氧化钠溶液、5.0 mL水及20 mL甘油组成） ，加上
述1.0 mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热20s，冷却，立即使用。
A.9.2.16  铅标准溶液：称取约0.160 g硝酸铅，精确至0.000 2g,置于1000 mL容量瓶中，加5 mL硝酸
与50 mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取10 mL±0.02 mL贮备液，置GB 14752—2010
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于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10 μg的Pb）。配置与贮存用的玻
璃仪器均不得含铅。
A.9.3  分析步骤
按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录VIII H重金属检查法第二法测定，具体方法如下： 
取A.8中遗留的残渣，加0.5 mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取1.0 g实验室样品，缓缓
灼烧至完全炭化，冷却至室温，加0.5mL  ～1.0mL硫酸，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加0.5
mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，冷却至室温，在500℃～600℃灼烧至完全灰化） ，冷却至室
温，加2 mL盐酸，置水浴上蒸干后加15 mL水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性， ，再加2 mL乙酸
盐缓冲液（pH3.5），微热溶解后，移置纳氏比色甲管中，加水稀释成25 mL；另取配制实验室样品溶
液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加2 mL乙酸盐缓冲液（pH3.5）与15 mL水，微热溶解后，移置纳氏比
色乙管中，加1 mL±0.01 mL标准铅溶液，再用水稀释成25 mL；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺
试液各2 mL，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得
更深。
A.10    砷盐的测定
称取5.0 g±0.01 g实验室样品、量取 10 mL±0.05 mL限量砷标准溶液（每1 mL溶液相当于1 μg
砷），分别按GB/T 5009.76—2003第一法中5.2.2干灰化法处理试样后，按第二法砷斑法检测样品。试
样的砷斑不得深于标准砷斑。
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附 录 B
（规范性附录） GB 14752-2010 食品添加剂 维生素B2(核黄素).
维生素B2红外光吸收图谱
 
 
注：引自《药品红外光谱集》447 图 第一卷（1995）中华人民共和国卫生部药典委员会编
图B.1  维生素B2红外光吸收图谱
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